東城蚜蟲吸植物韌皮部汁液-昆蟲觀察顯微鏡

作者：發(fā)布時(shí)間：2022-07-02 20:47:58點(diǎn)擊：2253

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蚜蟲吸植物韌皮部汁液-昆蟲觀察顯微鏡

蚜蟲是常見的農(nóng)業(yè)害蟲，以吸食植物韌皮部汁液維生，體內(nèi)含有內(nèi)共生菌Buchnera aphidicola，

兩者為的互利共生關(guān)系。Buchnera會(huì)提供宿主蚜蟲色胺酸（tryptophan）和苯丙胺酸（phenylalanine）

兩種芳香族胺基酸。3-deoxy-D-arabino- heptulosonate-7-phosphate synthase (DAHPS)

為芳香族胺基酸合成路徑所需要的酵素，aroH 為Buchnera DAHPS 的編碼基因。Buchnera aroH

缺乏轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)譯層級的調(diào)控，

其異位調(diào)控推測區(qū)和其他細(xì)菌沒有完全保守，且因?yàn)锽uchnera基因的表現(xiàn)不需要隨生長環(huán)境的變化而改變，

是故認(rèn)為Buchnera DAHPS可能不受回饋調(diào)控。由于Buchnera 無法在蚜蟲體外進(jìn)行一般細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，

研究的目的在于建立E. coli 表現(xiàn)系統(tǒng)，來研究Buchnera DAHPS 酵素功能及回饋調(diào)控。實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知，

Buchnera DAHPS 可以補(bǔ)償大腸桿菌芳香族胺基酸突變株的營養(yǎng)缺失，測得Buchnera DAHPS對受質(zhì)PEP及E4P的Km分

別為176 μM及290 μM，會(huì)受到最終產(chǎn)物tryptophan與phenylalanine的部份抑制，I0.5分別為19.7 μM

與168.4 μM，更大抑制百分比為61.7％與72.1％。進(jìn)一步利用overlap-extension PCR建立帶有T7 promoter

的表現(xiàn)載體，轉(zhuǎn)型到大腸桿菌BL21 (DE3) T7 系統(tǒng)，雖然可以大量表現(xiàn)Buchnera DAHPS，

但表現(xiàn)蛋白出現(xiàn)在不可溶的部份，嘗試低溫誘導(dǎo)、共同表現(xiàn)及重新折疊，

仍無法改善其錯(cuò)誤折疊及穩(wěn)定使其恢復(fù)活性

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