海淀顯微鏡研究DNA所用樣品的制備實驗簡介
作者: 發布時間:2022-07-02 20:44:58點擊:1469
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顯微鏡研究DNA所用樣品的制備實驗簡介
干細胞轉染用標的載體DNA制備
1. 標的載體質體DNA的抽取
(a)核心建議使用“CsCl banding”抽取標的載體DNA,
(b)本核心也接受以Endofree Plasmid Maxi Kit(Qiagen)制備的DNA。
2. 標的載體DNA直線化
(a)交至核心的標的載體DNA需直線化。作法是取200 mg DNA(依“步驟1”制備)經適當的限制酶切割后,
經電泳分析確定完全直線化后,用phenol萃取兩次,接著用chloroform萃取兩次后,
加入1/20(vol.)5M NaCl,混合均勻后,加入2倍100%酒精沉淀,
最后將酒精沉淀的DNA送交核心進行后續實驗。
(b)另外,再同時交予核心200 mg未經直線化DNA(依“步驟1”制備)
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