海淀霉菌代謝試驗(yàn)觀察用倒置生物顯微鏡廠商

作者：發(fā)布時(shí)間：2022-07-02 20:45:58點(diǎn)擊：2487

信息摘要：

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霉菌代謝試驗(yàn)觀察用倒置生物顯微鏡廠商

血清學(xué)的性狀：

黴漿菌之同定上，以對(duì)應(yīng)之標(biāo)準(zhǔn)抗血清的作用與否，為最確實(shí)之準(zhǔn)則。

A、發(fā)育阻止試驗(yàn)：

黴漿菌于培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，若有對(duì)應(yīng)之抗血清存在下，菌體被抗血清中和，其發(fā)育將受阻止，

故可利用此現(xiàn)象以同定其種別。

抗血清的制作：

(a) 將標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)液體培養(yǎng)基大量培養(yǎng)3~7天后 (3000~5000ml)，以30000 G三次遠(yuǎn)心洗滌，

濃縮成原菌液量的1/50~1/100倍之菌液，分注于小試管2ml置-70℃?zhèn)溆谩?/div>

(b) 將濃縮抗原與等量的Freund complete adjuvant混合后以1ml皮內(nèi)注射家兔；

3周后抗原與等量的Freund incomplete adjuvant混合后，以1ml皮內(nèi)注射；

經(jīng)3周后以不加adjuvant之抗原2ml腹腔內(nèi)注射，1周后采血分離血清。

置于4~10℃水箱內(nèi)使其乾燥，然后改置于-20℃保存?zhèn)溆谩?/div>

(d) 發(fā)育阻止試驗(yàn)術(shù)式：待測(cè)檢體經(jīng)液體培養(yǎng)基37℃ 24~48小時(shí)培養(yǎng)后，

取0.5ml接種至固體培養(yǎng)基，令其全面覆蓋培養(yǎng)基面，置于37℃，把皿蓋稍為打開(kāi)，

讓皿內(nèi)之液體蒸發(fā)乾燥后；把抗血清濾紙置于培養(yǎng)基面上，然后倒置于5% CO2，

37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，經(jīng)2~3天培養(yǎng)，觀察其發(fā)育阻止圈，若檢驗(yàn)體與抗血清為同種時(shí)，

則可見(jiàn)明顯發(fā)育阻止圈，否則無(wú)發(fā)育阻止圈形成。

B、代謝阻止試驗(yàn)：

黴漿菌于培養(yǎng)基中發(fā)育時(shí)產(chǎn)生代謝物質(zhì)，將引起pH值之變化，致培養(yǎng)基中的色調(diào)有所改變，

故于培養(yǎng)基中加入對(duì)應(yīng)抗血清時(shí)，將阻止黴漿菌的發(fā)育，相對(duì)地其代謝活性也受阻，

培養(yǎng)的色調(diào)變化也有受阻現(xiàn)象，故以此理可同定黴漿菌的種別。

(a) 代謝阻止試劑之配制：各以Hayflick之處方為基礎(chǔ)培養(yǎng)基

【2.1% PPLO broth W/O cv (Difco) 7%；馬血液2%；25%新鮮酵母抽出液1%；

Thalium acetate 1 : 2000；青黴素G 500 u/ml；phenol red 0.002%】

分別加入被檢物質(zhì)如1%葡萄糖，L-arginine，2,3,5-triphenyltetra zolium chloride等，

并把pH調(diào)整至7.4~7.6，再分別以3ml分裝于小試管，置于4~10℃?zhèn)溆谩?/div>

(b) 代謝阻止試驗(yàn)術(shù)式：經(jīng)18~24小時(shí)培養(yǎng)于液體培養(yǎng)基之檢體，

分別以上述各被檢物質(zhì)培養(yǎng)液稀釋成104CFU/ml；同樣以各被檢物質(zhì)培養(yǎng)液把

抗血清依2倍釋稀法稀釋成40~640倍不同稀釋倍數(shù)；然后由不同稀釋倍之血清中各取0.25ml，

黴漿菌稀釋液0.5ml，分別與各代謝阻止試驗(yàn)用之培養(yǎng)液1.25ml混合之；經(jīng)37℃，3~7日培養(yǎng)觀察，

若有色變即為陽(yáng)性反應(yīng)。也即是檢體與抗血清為同種。

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