海淀顯微鏡下用微小玻璃針挑出微量的白血球細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

作者：發(fā)布時(shí)間：2022-07-02 20:47:10點(diǎn)擊：2020

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顯微鏡下用微小玻璃針挑出微量的白血球細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

DNA檢品量過(guò)少，再經(jīng)DNA萃取純化后，檢品DNA往往已漏失不見(jiàn)的困擾，

盡管PCR技術(shù)理論上應(yīng)可將極微量的DNA做等比級(jí)數(shù)的擴(kuò)大，但漏失不完整的、

甚至是完全漏失DNA的檢品，就算是使用目前最受?chē)谀坎V泛運(yùn)用于人別鑒定的short tandem repeats（STR），

雖有其DNA長(zhǎng)度較短、較容易PCR復(fù)制的優(yōu)點(diǎn)，也常常無(wú)法得到完美的STR 基因座分型結(jié)果。

解決微量證物的DNA檢出不良情形，曾實(shí)驗(yàn)以顯微注射系統(tǒng)，

在顯微鏡下用特殊微小玻璃針挑出檢品中微量的白血球細(xì)胞，舍棄一般傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)的DNA萃取方式，

利用熱漲冷縮的原理將細(xì)胞DNA釋放出來(lái)，經(jīng)PE Applied Biosystems公司出品的STR AmpFlSTR Cofiler Kit試驗(yàn)，

其基因座包括D3S1358、D16S539、TH01、TPOX、 CSF1PO 、D7S820及可辨別性別的Amelogenin，

在初步的研究發(fā)現(xiàn)，在單一細(xì)胞PCR的Cofiler STR分型的實(shí)驗(yàn)中，大多數(shù)的基因座型別可被成功分型出來(lái)，

但也有些異合子（Heterozygous loci）基因座型別因優(yōu)勢(shì)的PCR復(fù)制產(chǎn)生基因型漏失或因復(fù)制不全導(dǎo)致基因型

增多等基因座型別失真的現(xiàn)象，幸運(yùn)的是并非所有的單一細(xì)胞PCR皆會(huì)產(chǎn)生基因型漏失或基因型增多的失真現(xiàn)象，

所以多次重復(fù)做單一細(xì)胞PCR的分析將可得到較正確的結(jié)果，

單一細(xì)胞PCR Cofiler STR分型的實(shí)驗(yàn)中雖未能得到穩(wěn)定的結(jié)果，但將此技術(shù)使用粒線(xiàn)體DNA的定序分型上，

卻有明確及穩(wěn)定的結(jié)果可供鑒定。另外將白血球細(xì)胞數(shù)提高至10至30個(gè)來(lái)進(jìn)行Cofiler STR的微量細(xì)胞PCR分型，

所有的基因座型別皆可穩(wěn)定正確的表現(xiàn)出來(lái)，建立在上述的研究基礎(chǔ)上，

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