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細(xì)菌生長(zhǎng)觀察用倒置顯微鏡—菌落觀察與計(jì)算法
I.系列稀釋
1. 將試管標(biāo)上欲稀釋倍數(shù)，如 10
-1、10-2、10-3；并于每管加入900 μl 蒸餾水。
2. 取100 μl 原菌液加入支稀釋管中混勻，再由此管吸出100 μl 加至下
一稀釋管中混勻，以此類推，進(jìn)行系列稀釋。
II.涂盤
1. 取三個(gè)LB plate，在培養(yǎng)皿底部標(biāo)明組別及日期，并寫上稀釋倍數(shù)。
2. 從不同稀釋管中各取出50 μl 樣品，加入標(biāo)明稀釋倍數(shù)的LB plate。
3. 取出浸于95%酒精溶液的三角玻棒，以燃燒法??將酒精燃盡后，輕觸LB
plate 無(wú)菌處或藉由空氣冷卻，待玻棒冷卻才能進(jìn)行涂盤。 【務(wù)必注意！
高溫或著火的三角玻棒不可插回酒精杯中，以免發(fā)生火災(zāi)! 玻棒彎曲
部分應(yīng)朝下，避免酒精沿玻棒燒傷手部】
4. 涂盤時(shí)，將玻棒輕放于平板表面，以左手旋轉(zhuǎn)LB plate，右手將玻棒前
后推動(dòng)，使菌液均勻涂布于平板表面。
5. 將玻棒浸于95%酒精中，取出后再以火焰燃燒玻棒，進(jìn)行滅菌。
6. 待玻棒冷卻再進(jìn)行第二個(gè)培養(yǎng)皿的涂盤。
7. 使用封口蠟?zāi)⑴囵B(yǎng)皿封好并倒置，于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜，隔日
觀察及計(jì)算菌數(shù)一般以30~300 個(gè)菌為主。
觀察與計(jì)算
1. 觀察并計(jì)算所有平板上之菌落數(shù)，若平板上菌落數(shù)超過(guò)300 視為過(guò)多無(wú)
法計(jì)算，記錄為too numerous to count (TNTC)，若菌落數(shù)少于30 視為過(guò)
少，記錄為too few to count (TFTC)，僅計(jì)算30 至300 之間的菌落數(shù)，
凡表面或表面下之菌落均需計(jì)算在內(nèi)。
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