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用高倍率的物鏡聚焦在螢光樣本上提高解析度
另一個將光學(xué)影像空間解析度向前邁進一大步的是由德國 Stefan Hell 教授所發(fā)展的遠場光學(xué)奈米顯微術(shù)。
這個技術(shù)是由掃瞄螢光顯微術(shù)出發(fā)，也即將激光用高倍率的物鏡聚焦在螢光樣本上，
移動焦點在樣本上掃瞄并不斷收集每一點的螢光強度，累積起來即可組合成一張螢光影像。
重要的突破點在于想出要提高解析度，除了盡可能把聚焦光點弄小之外，能不能讓發(fā)出螢光的范圍縮小？
要知道，所謂繞射極限并沒有限制我們觀察距離很遠的個別單分子螢光的能力，
但是當(dāng)這些螢光分子間距離近到小于繞射極限時，我們就會無法分辨?zhèn)€別分子位置。
假設(shè)有兩個同樣的螢光分子 A 和 B 靠的非常近，正常的聚焦光點一定會同時激發(fā)這兩個分子的螢光，
如果有某種辦法在激發(fā)時強迫旁邊的 B 不發(fā)光，只有 A 發(fā)光。接著再移動樣本或光點使得 B 發(fā)光 A 不發(fā)光，
便有可能在空間上解析出 A 和 B 的影像來。因此，Hell 教授提出的概念基本上是想辦法將焦點附近的螢光分子的發(fā)光能力暫時抑制掉，
他將之命名為 STED
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