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雙股分離在DNA合成之前
雙股螺旋構造會自動地被DNA解旋酶 (helicase) 解開。
大腸桿菌最主要的解旋酶，是形成六合體 (hexamer) 的蛋白質DnaB。
解旋酶不會損毀DNA，只是干擾維持堿基聚合在一起的氫鍵。此過程需要能量的供應，而能量由解旋酶降解ATP所提供。
親代DNA分離的兩股為互補，所以可互相配對。為了制造出新的股，原來的兩股必須分離，當作模板使用。
這工作由單股結合蛋白質 (single strand binding protein; SSB protein) 來完成。此蛋白質可以結合在未配對的單股上，
避免兩段原來股重新黏合。
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