通州霉菌代謝試驗觀察用倒置生物顯微鏡廠商
作者: 發布時間:2022-07-02 20:45:58點擊:2482
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霉菌代謝試驗觀察用倒置生物顯微鏡廠商
血清學的性狀:
黴漿菌之同定上,以對應之標準抗血清的作用與否,為最確實之準則。
A、 發育阻止試驗:
黴漿菌于培養基中培養時,若有對應之抗血清存在下,菌體被抗血清中和,其發育將受阻止,
故可利用此現象以同定其種別。
抗血清的制作:
(a) 將標準菌株經液體培養基大量培養3~7天后 (3000~5000ml),以30000 G三次遠心洗滌,
濃縮成原菌液量的1/50~1/100倍之菌液,分注于小試管2ml置-70℃備用。
(b) 將濃縮抗原與等量的Freund complete adjuvant混合后以1ml皮內注射家兔;
3周后抗原與等量的Freund incomplete adjuvant混合后,以1ml皮內注射;
經3周后以不加adjuvant之抗原2ml腹腔內注射,1周后采血分離血清。
(c) 抗血清濾紙的制作:將直徑8mm之濾紙吸取標準抗血清后,
置于4~10℃水箱內使其乾燥,然后改置于-20℃保存備用。
(d) 發育阻止試驗術式:待測檢體經液體培養基37℃ 24~48小時培養后,
取0.5ml接種至固體培養基,令其全面覆蓋培養基面,置于37℃,把皿蓋稍為打開,
讓皿內之液體蒸發乾燥后;把抗血清濾紙置于培養基面上,然后倒置于5% CO2,
37℃培養箱內培養,經2~3天培養,觀察其發育阻止圈,若檢驗體與抗血清為同種時,
則可見明顯發育阻止圈,否則無發育阻止圈形成。
B、 代謝阻止試驗:
黴漿菌于培養基中發育時產生代謝物質,將引起pH值之變化,致培養基中的色調有所改變,
故于培養基中加入對應抗血清時,將阻止黴漿菌的發育,相對地其代謝活性也受阻,
培養的色調變化也有受阻現象,故以此理可同定黴漿菌的種別。
(a) 代謝阻止試劑之配制:各以Hayflick之處方為基礎培養基
【2.1% PPLO broth W/O cv (Difco) 7%;馬血液2%;25%新鮮酵母抽出液1%;
Thalium acetate 1 : 2000;青黴素G 500 u/ml;phenol red 0.002%】
分別加入被檢物質如1%葡萄糖,L-arginine,2,3,5-triphenyltetra zolium chloride等,
并把pH調整至7.4~7.6,再分別以3ml分裝于小試管,置于4~10℃備用。
(b) 代謝阻止試驗術式:經18~24小時培養于液體培養基之檢體,
分別以上述各被檢物質培養液稀釋成104CFU/ml;同樣以各被檢物質培養液把
抗血清依2倍釋稀法稀釋成40~640倍不同稀釋倍數;然后由不同稀釋倍之血清中各取0.25ml,
黴漿菌稀釋液0.5ml,分別與各代謝阻止試驗用之培養液1.25ml混合之;經37℃,3~7日培養觀察,
若有色變即為陽性反應。也即是檢體與抗血清為同種。
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