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細(xì)胞培養(yǎng)基若培養(yǎng)細(xì)胞觀察實(shí)驗(yàn)-專業(yè)科學(xué)顯微鏡
培養(yǎng)細(xì)胞于基質(zhì)中
(1) 細(xì)胞培養(yǎng)基若培養(yǎng)細(xì)胞一段時(shí)間，因?yàn)榇x物的產(chǎn)生多具酸
性，使培養(yǎng)基變色為黃橘色，此時(shí)應(yīng)考慮更新培養(yǎng)基，以維
持細(xì)胞的正常生理與生長狀況。
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
設(shè)備
(1) 無菌無塵操作臺(tái) (2) 二氧化碳培養(yǎng)箱
(3) 相位差倒立顯微鏡 (4) 37℃恒溫水浴槽
(5) 微量自動(dòng)吸管 (6) 自動(dòng)吸取器
(7) 血球計(jì)數(shù)器（hemacytometer）
材料
(1) 細(xì)胞液 (2) DMEM-10% FBS
(3) trypsin-EDTA (4) DPBS
(5) 巴士德無菌吸管 (6) 滅菌處理好之基質(zhì)骨架
(7) 15 mL 無菌離心管
(8) 5 mL, 10 mL 無菌吸管
實(shí)驗(yàn)方法
(1) 預(yù)先以 75% 酒精浸泡基質(zhì)至少兩小時(shí)。
(2) 以 DPBS 清洗數(shù)次，置于無菌操作臺(tái)內(nèi)風(fēng)干。
(3) 細(xì)胞于培養(yǎng)皿中，如實(shí)驗(yàn)二以酵素 trypsin-EDTA 處理細(xì)胞，
實(shí)驗(yàn)三計(jì)算細(xì)胞總數(shù)，并移至 15 mL 離心管中，離心 1,000
rpm，3 分鐘后，以燒過的巴士德無菌吸管小心的移去上清液。
(4) 計(jì)算細(xì)胞總數(shù)后，估算培養(yǎng)基添加量，以得到 2x10
6cells/mL之細(xì)胞液。
(5) 加入所估算添加量的新鮮 DMEM-10% FBS 培養(yǎng)基于含細(xì)胞
之離心管中，以吸管上下吸放約 20 次，以充分打散細(xì)胞。
(6) 最后加入 100 μL細(xì)胞液至含基質(zhì)骨架之 96-well培養(yǎng)皿中，放
入含 5% CO2之 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
(7) 1 小時(shí)后于顯微鏡下觀察細(xì)胞附著于基質(zhì)骨架的情形，此時(shí)
大部份細(xì)胞應(yīng)已趴附于基質(zhì)骨架。
(8) 經(jīng)過適當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間后吸掉培養(yǎng)基，以 10% 福馬林溶液固定，
可進(jìn)行共軛聚焦顯微鏡或原子力顯微鏡之觀察
客服1