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細菌生長觀察用倒置顯微鏡—菌落觀察與計算法
I.系列稀釋
1. 將試管標上欲稀釋倍數，如 10
-1、10-2、10-3；并于每管加入900 μl 蒸餾水。
2. 取100 μl 原菌液加入支稀釋管中混勻，再由此管吸出100 μl 加至下
一稀釋管中混勻，以此類推，進行系列稀釋。
II.涂盤
1. 取三個LB plate，在培養皿底部標明組別及日期，并寫上稀釋倍數。
2. 從不同稀釋管中各取出50 μl 樣品，加入標明稀釋倍數的LB plate。
3. 取出浸于95%酒精溶液的三角玻棒，以燃燒法??將酒精燃盡后，輕觸LB
plate 無菌處或藉由空氣冷卻，待玻棒冷卻才能進行涂盤。 【務必注意！
高溫或著火的三角玻棒不可插回酒精杯中，以免發生火災! 玻棒彎曲
部分應朝下，避免酒精沿玻棒燒傷手部】
4. 涂盤時，將玻棒輕放于平板表面，以左手旋轉LB plate，右手將玻棒前
后推動，使菌液均勻涂布于平板表面。
5. 將玻棒浸于95%酒精中，取出后再以火焰燃燒玻棒，進行滅菌。
6. 待玻棒冷卻再進行第二個培養皿的涂盤。
7. 使用封口蠟膜將培養皿封好并倒置，于37 ℃培養箱中培養過夜，隔日
觀察及計算菌數一般以30~300 個菌為主。
觀察與計算
1. 觀察并計算所有平板上之菌落數，若平板上菌落數超過300 視為過多無
法計算，記錄為too numerous to count (TNTC)，若菌落數少于30 視為過
少，記錄為too few to count (TFTC)，僅計算30 至300 之間的菌落數，
凡表面或表面下之菌落均需計算在內。
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